• 產(chǎn)品名稱： CALU-3細(xì)胞;人肺腺癌細(xì)胞
• 產(chǎn)品編號(hào)： CL0062
• 細(xì)胞數(shù)量： 1*10^6
• 組織來源： 肺腺癌
• 細(xì)胞種屬： 人源
• 生長(zhǎng)特性： 貼壁
• 培養(yǎng)基： MEM
• 形態(tài)特征： 上皮
• 傳代方法： 建議傳代比例為1：3至1：6
• 培養(yǎng)條件： 胎牛血清至終濃度為10％。環(huán)境：空氣，95％;二氧化碳（CO2），5％；溫度，37℃
• 細(xì)胞描述： 病腺癌；25歲；性別男；種族高加索
• 細(xì)胞凍存： 液氮凍存（凍存液基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO）
• 細(xì)胞運(yùn)輸： 干冰運(yùn)輸（2ml凍存管）或活細(xì)胞運(yùn)輸（T25瓶）

注意事項(xiàng)

凍存細(xì)胞接收后的處理：

1.干冰運(yùn)輸，收到細(xì)胞后立即轉(zhuǎn)入-80℃冰箱短暫中轉(zhuǎn)或直接復(fù)蘇；
2.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)*揮發(fā)、凍存管瓶蓋破裂脫落,請(qǐng)立即拍照后與我們聯(lián)系。

復(fù)蘇細(xì)胞接收后的處理：

1.收到細(xì)胞后，請(qǐng)首先檢查培養(yǎng)瓶是否破損或漏液，培養(yǎng)液是否混濁，如有漏液及培養(yǎng)液混濁情況請(qǐng)立即拍照把圖片發(fā)給我們。
2.75%酒精消毒瓶身后放培養(yǎng)箱中靜置4-6h后，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)并拍照100倍和200倍的照片，若有貼壁細(xì)胞脫落，可收集上清離心，將沉淀用新的培養(yǎng)基接種至新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。
3.建議收到當(dāng)天不要消化處理，如果細(xì)胞長(zhǎng)滿90%，可選擇傳代處理。
4.如您收到細(xì)胞3天內(nèi)沒有反饋相關(guān)問題，出現(xiàn)的細(xì)胞問題將不提供免費(fèi)重發(fā)服務(wù)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。