培養(yǎng)基的配制

 一、配制用水
培養(yǎng)基的大部分是水，所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn)，水的電阻應(yīng)為200萬歐姆，一般實驗室里以玻璃蒸餾器制備的
雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。
二、培養(yǎng)基
培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至7.2～7.4，若pH值超
過7.6或遠低于6.8，則大多數(shù)細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。
三、血清
培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體，置4℃冰箱存放待用。配制時含
量視培養(yǎng)細胞種類、時間而定，一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制，可選用無血清培養(yǎng)基。
四、抗菌素
為防止培養(yǎng)時期細菌的污染，可在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)抗菌素，一般用量與組織細胞培養(yǎng)相同：卡那霉素100單位/毫升，或雙抗--青霉素100單位/
毫升，鏈霉素100微克/毫升。
五、植物血凝素（PHA）
非增殖期的細胞不能制備染色體，如人外周血淋巴細胞，但在離體培養(yǎng)過程中，在PHA的作用下，可被刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細胞而進入有絲分裂。
經(jīng)實驗測定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44—48小時和68—72小時。
PHA有粘多糖，蛋白質(zhì)兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂，蛋白質(zhì)起凝集作用。PHA激活的細胞數(shù)隨其濃度而增加，直至全部免疫活性細胞均
被激活為止，但PHA濃度過高會引起凝集，一般采用4%濃度為好。